【摘要】：油茶(Camellia oleifera Abel.)是我國(guó)重要的木本油料作物,在我國(guó)有一千多年的種植歷史。山茶油富含不飽和脂肪酸,具有很高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值,被譽(yù)為“東方橄欖油”。油茶蒲為油茶果的外種皮,占油茶果濕重的60%,但是目前利用率極低。本論文對(duì)油茶蒲中的活性物質(zhì)進(jìn)行分離鑒定,并對(duì)其減肥降脂作用進(jìn)行系統(tǒng)研究。主要研究結(jié)論如下： (1)用50%的乙醇-水溶液熱回流提取得到油茶蒲提取物(OCE),采用高速逆流色譜直接從油茶蒲提取物中分離制備獲得3個(gè)化合物單體,通過(guò)紅外光譜、紫外光譜、質(zhì)譜、核磁等技術(shù)鑒定其分別為沒(méi)食子酸(GA)、鞣花酸(EA)和3-0-甲基鞣花酸-4’-O-β-D-吡喃葡萄糖(MEAG)。 (2)高效液相色譜測(cè)得OCE中GA、EA、MEAG的含量分別為3.67、3.20、5.58 mg/g。采用鹽酸水解和大孔樹(shù)脂吸附-解析法對(duì)OCE進(jìn)行處理,酸水解產(chǎn)物中GA和EA含量分別為OCE的18倍和4倍,D101大孔樹(shù)脂的40%乙醇洗脫物中MEAG的含量是OCE的2.7倍。 (3)采用脂肪酸合酶(FAS)抑制的體外評(píng)價(jià)體系,測(cè)得OCE、EA和MEAG對(duì)FAS的半抑制濃度(IC50)分別為2.30、2.50和37.73μg/mL。FAS抑制動(dòng)力學(xué)研究表明,OCE對(duì)底物A-CoA為競(jìng)爭(zhēng)性抑制,對(duì)M-CoA、NADPH均為混合性(競(jìng)爭(zhēng)性-非競(jìng)爭(zhēng)性)抑制。EA和MEAG對(duì)M-CoA和NADPH的抑制類(lèi)型均為混合性抑制和反競(jìng)爭(zhēng)性抑制。對(duì)底物A-CoA而言,EA和MEAG分別為混合性抑制和競(jìng)爭(zhēng)性抑制。表明EA和MEAG主要通過(guò)作用于酰基轉(zhuǎn)移酶結(jié)構(gòu)域,或特異性結(jié)合FAS-NADPH而使FAS失活。 (4)采用3T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖抑制試驗(yàn),對(duì)油茶蒲中分離得到的活性化合物進(jìn)行功能評(píng)價(jià),表明GA能顯著抑制前脂肪細(xì)胞增殖,250μM給藥24 h,對(duì)前脂肪細(xì)胞的增殖抑制率達(dá)66.5%；’通過(guò)觀察3T3-L1前脂肪細(xì)胞的分化,發(fā)現(xiàn)OCE、GA、EA及MEAG均對(duì)前脂肪細(xì)胞的分化有抑制作用,并能減少脂肪細(xì)胞中的甘油三酯(TG)含量；同時(shí),發(fā)現(xiàn)MEAG有促進(jìn)成熟脂肪細(xì)胞中脂肪分解的作用,10μM的劑量即能顯著促進(jìn)脂肪細(xì)胞釋放甘油。 (5)采用預(yù)防型小鼠肥胖試驗(yàn)?zāi)Ｐ?通過(guò)對(duì)高脂飼料喂養(yǎng)的小鼠分別給予100 mg/kg、200mg/kg、300 mg/kg OCE和100 mg/kg GA,結(jié)果顯示：OCE對(duì)小鼠的減肥作用呈劑量依賴(lài)關(guān)系,100 mg/kg的OCE即能顯著降低試驗(yàn)小鼠的體重增長(zhǎng)率(P0.05); 200 mg/kg OCE對(duì)血脂和體重有較全面的作用,能夠顯著降低小鼠血清TC、TG,提高HDL-C,降低附睪和腎周脂肪,提高肝臟中SOD的活性,降低肝臟中的FAS活性,減輕肝臟脂滴積累作用。100 mg/kgGA能顯著降低小鼠體重增長(zhǎng)率、血清中的TC含量,減少腎周脂肪,降低肝臟FAS活性和MDA含量,減輕肝臟脂滴積累作用,提高肝臟中SOD的活性。 (6)采用治療型小鼠肥胖試驗(yàn)?zāi)Ｐ?通過(guò)對(duì)肥胖小鼠分別灌胃100、200、400 mg/kg OCE和100 mg/kg GA,結(jié)果顯示200 mg/kg、400 mg/kg OCE能顯著減輕高脂膳食誘導(dǎo)的肥胖小鼠體重,分別在第24天和第10天與模型組達(dá)到顯著性差異。400 mg/kg的OCE對(duì)肥胖小鼠表現(xiàn)出較全面的減肥降脂作用,能夠顯著降低肥胖小鼠體重以及血清中的TC、TG含量,降低腎周、附睪脂肪以及肝臟中的MDA含量和FAS活性。而100 mg/kg GA對(duì)肥胖小鼠的治療效果不明顯。 (7)安全性評(píng)價(jià)試驗(yàn)表明,油茶蒲提取物油大、小鼠經(jīng)口急性毒性最大耐受量(MTD)均大于20.0 g/kg體重,屬無(wú)毒級(jí)。Ames試驗(yàn)、小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)和小鼠精子畸形實(shí)驗(yàn)結(jié)果均為陰性,表明油茶蒲提取物無(wú)致突變性。慢性毒性試驗(yàn)顯示,經(jīng)口給予大鼠0、0.5、1.0、2.0g/kg油茶蒲提取物30d,未見(jiàn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物出現(xiàn)中毒癥狀,大體解剖及組織學(xué)觀察未見(jiàn)異常病理改變,并且大鼠體重、進(jìn)食量、食物利用率、血常規(guī)、血生化、臟體比等均無(wú)明顯改變,表明油茶蒲提取物的大鼠30 d喂養(yǎng)試驗(yàn),最大未觀察到有害作用劑量(NOAEL)為2.0 g/kg體重。 油茶蒲提取物在脂肪酸合酶抑制體系、前脂肪細(xì)胞分化體系、預(yù)防肥胖動(dòng)物模型和肥胖動(dòng)物治療模型中均有顯著表現(xiàn),表明油茶蒲提取物能夠有效改善血脂異常,對(duì)膳食誘導(dǎo)的肥胖具有良好的預(yù)防和治療效果,并且安全毒性學(xué)試驗(yàn)表明它具有較高的安全性,是一種極具開(kāi)發(fā)價(jià)值的資源。